PCR em Tempo Real

Com a detecção baseada em RNA, o RNA é primeiro convertido em DNA complementar (cDNA) por transcrição reversa. Com a detecção baseada em DNA, esta etapa não é necessária. Cada kit de teste EURORealTime contém todos os reagentes de PCR prontos para uso, incluindo transcriptase reversa e/ou DNA polimerase e os primers e sondas específicos validados. Desta forma, o número de etapas de pipetagem é reduzido ao mínimo: os reagentes de PCR prontos para uso são apenas pipetados juntos e então o DNA/RNA é adicionado.

 As sequências características relevantes de DNA/cDNA são amplificadas milhões de vezes pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Aqui, duas moléculas iniciais de DNA (primers) definem a região que será copiada. Se a amostra do paciente contiver a sequência de DNA correspondente (sequência alvo), os iniciadores poderão ligar-se a ela e será produzida uma cópia da sequência alvo. Esta reação é repetida muitas vezes para que a região do DNA entre os primers seja copiada exponencialmente. Durante cada ciclo de PCR, sondas específicas de DNA marcadas com fluorescência também se ligam à sequência alvo. Estes só causam um sinal de fluorescência quando o DNA foi amplificado. Ao final de um ciclo de PCR, a intensidade da fluorescência é medida, para que a amplificação do DNA possa ser acompanhada em tempo real. Se as sequências alvo não estiverem presentes na amostra do paciente, os iniciadores e as sondas não se podem ligar a elas, o ADN não é amplificado e o sinal de fluorescência não aumenta. Ao incluir os padrões de quantificação correspondentes, este método também permite a